最让分析工作者头疼的项目中,同分异构体的分离分析绝对能榜上有名。类似的结构、相近的极性,总是让各路英雄好“柱”纷纷折戟。大家往往是尝试了各种类型的色谱柱,使出各种招数,也还是达不到分离度要求。
这时候,就必须请出我们异构体分离的“宝藏神柱”Shim-pack Scepter HD-C18-80。

Shim-pack Scepter HD-C18-80作为杂化硅胶Scepter家族中的一员大将,拥有其他常规色谱柱不具备的特殊工艺——高密度键合工艺,通过缩小了C18链之间的间距,达到了26.0%的高载碳量,能更好的识别不同化合物在空间结构上的微小差异,从而使难解难分的异构体峰实现基线分离。

真有这么神奇吗?通过两个案例,我们来一探究竟。
案例一:
某双键位置异构体的分离

如图所示,某API与杂质之间仅一个双键位置差异,实验员在常规C18柱上反复尝试,也仅能将分离度做到1.6,无法满足使用需求。然而,将同样的方法在Shim-pack Scepter HD-C18-80上进行实验,即可达到2.2的分离度,轻松满足需求。

色谱柱:Shim-pack Scepter HD-C18-80(4.6 mm × 250 mm,5 μm)
流 速:0.8 mL/min
进样量:10 μL
柱 温:25 ℃
检测器:UV,270 nm
流动相:A:20 mM磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH 2.2);B:乙腈
梯度条件:

小结:
分析化合物结构,可以看到双键位置的差异带来了这部分空间结构的呈现平面与立体的差异,从而被高密度键合C18链捕捉,从而实现了更好的分离效果。
案例二
某芳环取代异构体的分离

如图所示,某芳环异构体化合物(主成分)中,存在由原料引入的两个甲基位置异构体(杂质1,杂质2),以及原料和原料的异构体(杂质A,杂质B,杂质C)。这两组化合物由于极性差异,组间出峰时间差别较大,同时组内又难以分离。同时由于反应前后R1和R2基团中,均包含有叔胺官能团,对常规的酸性或中性条件下的分离有带来了挑战。实验员尝试了不同键合相的色谱柱以及不同的pH条件,最终在Shim-pack Scepter HD-C18-80上、以pH9.0的流动相条件完成了六个峰的基线分离。

色谱柱:Shim-pack Scepter HD-C18-80(4.6 mm × 150 mm,3 μm);
柱流速:1 mL/min;
检测器:PDA 254 nm;
柱温:20 ℃;
流动相:流动相A:0.04 mol/L磷酸氢二钾(用1 mol/L NaOH调节pH值至9.0)
流动相B:乙腈;
进样量:5 μL
梯度条件:

小结:
分析化合物结构,甲基的位置异构仅能提供微小的疏水作用力差异,载碳量26.0%的色谱柱对这种疏水作用力差异能有效识别并产生良好的分离效果。同时耐受pH 1-12的杂化硅胶能很好的适应碱性流动相条件,保证了色谱柱的耐用性。
结语
从上述案例可以看出,Shim-pack Scepter HD-C18-80这根色谱柱对空间结构、疏水作用力存在差异的同分异构体,具有其他色谱柱所不具备的良好的识别能力,充分体现了高密度键合带来的强大作用,无愧为同分异构体分析的“宝藏神柱”!
HD-C18使用小贴士:
色谱柱活化、冲洗和保存:
新柱可以使用纯有机试剂(如甲醇、乙腈),从0.1mL/min流速慢慢提高到正常使用流速的一半,冲洗总体积以20倍柱体积为宜。
日常使用结束后,使用10%有机相/水和纯有机相各冲洗20倍柱体积,然后保存在纯有机相中。如遇到常规冲洗无法解决的问题,可以参考特别的清洗方法(点击划线标题查看):实用干货丨还没放假呢,峰就先“瘫”了?快给柱子洗个澡吧!
注意事项:
HD-C18柱采用了高密度键合技术,因此不适宜高比例水相条件,建议有机相比例不低于10%。
建议在色谱柱前端连接在线过滤器和保护柱以延长色谱柱使用寿命。
在线过滤器使用与维护方法:
https://www.shimadzu-sglc.com/video/281038.html
液相保护柱安装方法:
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