在多肽分析方法开发过程中，不同的分析阶段可能选择不同的方式来做：

平台方法：选择通用的 C18 色谱柱；流动相体系：FA、NH₄FA、TFA、MSA 等。

柱筛平台：结合软件系统进行方法优化；搭配不同的键合相：C18、C8、Phenyl、PFPP、C4。

单独一根一根筛选：先一根一根筛选键合相，筛选出合适的键合相；筛选不同厂家的最优的键合相；根据工艺是否还要优化，持续优化方法。

依托 LabSolutions MD 方法开发软件，结合岛津针对多肽分析检测不同选择性的色谱柱，实现强强联动。批量筛选色谱柱、检测条件，全面快速助力多肽分析方法开发。

此次研究基于一种肽和五种具有不同序列的有关杂质作为合成肽的模型样品（表 1）。制备全长肽（FLP：B-促黑素）、较短长度产物的 p.A1del、p.A1_E2del、p.A1_K3del 和 p.A1_D5del 的缺失序列以及 Met(O2)（FLP 中的甲硫氨酸被氧化成甲硫氨酸碳）作为样品。

此次筛选中，分别筛选了不同的键合相，涉及 C18、C8、Phenyl、PFPP 等，同时也考虑了不同孔径的影响，对比了常规 120 Å 孔径的 C18 以及 300 Å 大孔的 C18 色谱柱。

通过流动相和色谱柱的筛选结果表明，水相流动相和有机相流动相的组成对 FLP 及相关杂质的分离有显著影响。基于 LabSolutions MD 软件计算评估值，如表 2 所示。从中选择最优的分析条件进行进一步方法优化。

进一步优化柱温，考察筛选出评估值最高的3个检测条件下，柱温对于分离的影响。使用 Scepter C8-120 色谱柱，通过 0.1%甲酸和甲醇的流动相组合物，分离p.A1del和 FLP 之间的分离度最高。

后期再进行进一步的条件优化阶段，通过调整起始流动相比例、梯度条件、流速等进一步提高分离度和稳定性。

最终结合 LabSolutions MD，进行最佳条件下的设计空间评价，通过叠加设计空间自动搜索满足多个标准的最佳条件，找到最佳的检测条件，实现杂质的有效分离。

在满足全部评价标准的条件下，确定最佳分析条件，实现 FLP 与各有关杂质的有效分离。

岛津 Shim-pack Scepter C8 色谱柱是一款高密度键合的 C8。对于保留较强的多肽样品，有的时候选择常规 C8 没有达到比较好的分析检测结果。

但是高密度键合的 C8 疏水作用力比常规的 C8 作用更强，而又不像常规 C18 那么保留强。对于多肽分析检测是一个很好的选择！