乳铁蛋白是乳及乳制品中重要营养指标之一，常被用作营养强化剂添加在婴幼儿配方食品中。但部分婴幼儿会对乳蛋白过敏，需要食用含水解蛋白的婴配乳粉或特医乳粉。此类产品中的水解蛋白和多肽会干扰乳铁蛋白检测，导致国标方法回收率不达标。
行业反馈后，国家食品安全风险评估中心已明确现行的GB 5009.299-2024不适用于含有水解蛋白的婴幼儿配方食品（其中包括特殊医学用途婴儿配方食品）[1]。
针对此问题，岛津SGLC在国标基础上开发了专用缓冲盐提取包，适用于乳蛋白部分水解、深度水解及氨基酸配方等特医婴儿配方乳粉，配合SHIMSEN肝素亲和柱，可保证良好的回收率与重现性。相关方案如下：
话题一：#样品前处理
采用专用提取盐包(适用于水解婴配粉，P/N：380-00930-10) + SHIMSEN 肝素亲和柱(3mg/3mL, PN: 380-00930-02)进行样品处理，实验操作和缓冲盐配置请按照完整版应用案例进行，步骤如下：
划重点TIPs：
①专用提取液配制方法：提取缓冲盐瓶内加入375ml水，溶解，加入8g体积分数为10%吐温-20溶液，混匀，用磷酸调pH至6±0.2，用水定容至500ml；
②专用提取液的温度不能超过50℃，否则乳铁蛋白有失活的风险，致使回收率偏低，本实验采用48℃水浴；
③离心完成后，立即移取10mL上清液到15mL离心管中备用，否则上层乳脂会逐渐再溶解到水溶液中，干扰后续的上柱以及上机分析；
④SHIMSEN 肝素亲和柱包装盒内自带磷酸盐缓冲盐包Ⅰ和Ⅱ，使用前按要求溶解定容后即可用于活化；
⑤小柱及待净化液在上样前要恢复到室温；过柱时建议控制流速，每秒1-2滴(批量过柱时可采用自重流出)，流速过快会导致回收率偏低；
⑥优先建议离心后直接上机分析，不通过针头滤器，避免吸附损失；
⑦乳铁蛋白容易被玻璃小瓶吸附，建议使用PP材质的低吸附小瓶(PN：380-00511)。
话题二：上机分析
2.1 分析条件
仪器：Shimadzu LC-20AD 高效液相色谱仪
色谱柱：Shim-pack Scepter C4-300（5 μm，4.6×250 mm；P/N：227-31183-06；C4键合，30nm孔径，有机杂化硅胶颗粒填料，耐受三氟乙酸等低pH体系）
柱温：25 ℃
检测波长：280 nm
流速：1.0 mL/min
进样量：50 μL
流动相：A：0.1%三氟乙酸水溶液 B：乙腈
2.2 结果与讨论
2.2.1 色谱图
乳铁蛋白标准品溶液色谱图（12 μg/mL）
乳蛋白部分水解配方试样空白样品色谱图
乳蛋白部分水解配方试样加标样品（添加浓度：6 mg/100 g）色谱图
乳蛋白深度水解配方试样空白样品色谱图
乳蛋白深度水解配方试样加标样品（添加浓度：6 mg/100 g）色谱图
氨基酸配方试样空白样品色谱图
氨基酸配方试样加标样品（添加浓度：6 mg/100 g）色谱图
2.2.2 三种水解配方特医婴配粉中乳铁蛋白的添加回收结果
方案相关产品如下：
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小知识
乳铁蛋白
乳铁蛋白（lactoferrin， LF）是一种分子量约为 80 kDa的铁结合糖蛋白，具有铁调节[^[2]]、免疫调节[^[3]]、促进骨生长[^[4]]、保护消化系统健康[^[5]]等生理活性，是乳及乳制品中重要营养指标之一，常被用作营养强化剂添加在婴幼儿配方食品中。
GB14880-2012《食品安全国家标准 食品营养强化剂使用标准》[^[6]]中明确规定，婴幼儿配方食品中乳铁蛋白的最大允许使用量为1.0g/kg。在实际样品的乳铁蛋白测试过程中，可能会存在峰型拖尾、柱上残留、曲线线性不佳、回收率不稳定等问题。
目前，我国首个适用于乳制品中乳铁蛋白含量测定的国家标准《食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定》(GB 5009.299-2024)[^[7]]已开始施行——试样中的牛乳铁蛋白经磷酸盐缓冲液提取, 肝素亲和柱富集净化后, 反相高效液相色谱柱分离, 紫外检测器于280 nm 处检测, 外标法定量。
针对该检测，岛津可提供全套解决方案，包含前处理+色谱柱+通用耗材，详情点击国抽方案｜食品中乳铁蛋白的测定
· 参考资料 ·
[1]国家食品安全风险评估中心https://cfsa.net.cn/spaqbz/cjwtjd/spaqgjbzcjwtjd/index.shtml
[2] Cox T M, Mazurier J, Spik G, et al. Iron binding proteins and influx of irom across the duodenal brush border: Evidence for specific lactotransferrin receptors in the human intestine [J]. Biochimica et Biophysica Acta: BBA-General Subjects, 1979, 588(1), 120-128.
[3] Superti F, Agamennone M, Pietrantoni A, et al. Bovine lactoferrin prevents influenza A virus infection by interfering with the fusogenic function of viral hemagglutinin [J]. Viruses, 2019, 11(1): 51.
[4] Gibbons J A, Kanwar R K, Kanwar J R. Lactoferrin and cancer in different cancer models [J]. Frontiers in Bioscience: Scholar Edition, 2011, 3(3): 1080-1088.
[5] Cornish J. Lactoferrin promotes bone growth [J]. BioMetals, 2004, 17(3): 331-335.
[6] GB 14880-2012 食品安全国家标准 食品营养强化剂使用标准
[7] GB 5009.299-2024 食品安全国家标准 食品中乳铁蛋白的测定