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液相色谱柱及保护柱

  • 液相保护住的必要性？
    高效液相色谱仪中，保护柱安装在进样器和分析柱之间，通过流动相和样品溶液。它能够预先捕集能被分析柱牢固吸附，不能被流动相所洗涤的物质，保护并延长分析柱使用寿命。
  • 在线过滤器的必要性？
    高效液相色谱使用中，随着柱塞密封的磨损，落下的小颗粒会沿着管路进入样品进样阀，引起进样阀损害，进而引起色谱柱污染。在线过滤器安装在泵的出口和进样阀之间，采用滤杯式结构受液面积大，使用寿命长，既可有效的防止颗粒进入系统，又能保证足够的液流。
  • 疏水色谱的原理以及应用？
    疏水色谱 (Hydrophobic interaction chromatography，HIC):是利用样品分子与固定相的疏水力作用的不同，用流动相洗脱时，各组分迁移速度不同而达到分离的目的。流动相一般为pH 6-8的盐水溶液，具有对蛋白质的回收率高，蛋白质变性可能性小等优势。由于流动相中不使用有机溶剂，也有利于蛋白质保持固有的活性。
  • C18色谱柱堵塞了/出峰分叉/被压过高，如何再生？
    色谱柱的污染可能会导致峰形的变化、峰分裂、肩峰、柱效的变化或背压增加等问题。请参考以下方法进行清洗：
    10%甲醇水溶液（5倍柱体积）→ 含0.1% EDTA的水溶液（10倍柱体积）→ 0.2 M醋酸铵水溶液（10倍柱体积）→ 10%甲醇水溶液（5倍柱体积）→ 甲醇（5倍柱体积）→ 异丙醇（20倍柱体积）→ 甲醇（5倍柱体积）。
    在对色谱柱进行清洗时，为了避免色谱柱上的污染物或其他物质进入流通池，请断开色谱柱与检测器之间的连接；冲洗流速应尽量慢（操作流速的一半），以避免部分溶剂粘度过大而造成的柱压激增。
  • 离子排阻色谱法的原理以及应用？
    排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。离子排阻色谱由于Donnan电势的存在，强酸阴离子受阻于阳离子交换树脂之外，而低电离度弱酸分子能够进入到树脂内部，且通过溶质与树脂功能团之间的极性相互作用和溶质与树脂基体间的非极性相互作用为固定相所保留。
    离子色谱法具有灵敏、快速、简便易行的优点，已广泛应用于化学、能源、环保、电子工业、食品、医药卫生、造纸、石油化学、纺织等领域中，完成了阴离子、阳离子、过渡金属、有机酸、氨基酸和肽类等数百种离子和化合物的分析。
  • 色谱柱安装的注意事项？
    色谱柱在运输过程中或在没有使用时，它的两端总是用堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先移去两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方向保持一致。除非出于特殊考虑，例如为了清除堵在色谱柱入口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时，建议用户在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向。由于色谱柱的连接是整个色谱操作过程的一部分，如果密封卡套过紧，或安装不合适，或者密封卡套与色谱柱端口不匹配，都有可能导致溶液的泄漏。使用前需要将色谱柱与密封卡套相连接，从而将色谱柱接入 HPLC 系统。
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