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液相色谱中,色谱峰为什么会扩展?如何减少谙带扩张、提高柱效?
液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动相传质、停留流动相传质及柱外效应。在液相色谱中要减小谱带扩张,提高柱效,需要减小填料颗粒直径、减小填料孔穴深度、提高装填的均匀性、采用低粘度溶剂作流动相、流速尽可能低,同时要尽可能采用死体积较小的进样器、检测器、接头和传输管线等。
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杂化硅胶颗粒色谱柱的优势?
统硅胶颗粒色谱柱推荐的流动相pH为8,这是因为在高pH条件下,硅胶填料开始溶解,键合相也会水解(反应机理为:在碱性条件下,OH-亲核进攻硅胶基质,发生亲核取代反应,导致硅胶溶解及键合相的水解),导致柱效下降。
而杂化颗粒因嵌入硅甲基,亲核取代反应放缓,颗粒表面溶解速度明显放缓,故色谱柱寿命大大延长。
杂化颗粒的第二个优点是对碱性分析物峰形的改善。传统的硅胶色谱柱在分析碱性化合物时,因为硅醇基与碱性化合物存在离子交换作用,导致峰形拖尾,虽然一些色谱柱采用封端这一方法来改善拖尾,但是封端不可能完全进行,还是会有残留硅醇基,拖尾在所难免。而杂化颗粒在合成之时就引入硅甲基,从根源上减少了硅醇基,所以杂化颗粒酸性的降低使其在宽pH范围内为碱性化合物带来了对称的峰形。在方法开发的流动相pH优化阶段,杂化颗粒色谱柱可为不同pKa值酸性和碱性的混合分析物的分离提供了更宽的选择面。
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硅胶色谱柱可以分析碱性物质吗?
在pH>10的情况下,硅胶分子间的Si-O会断裂,因此固定相是硅胶的色谱柱不适宜用于碱性物质的分析。