反相/正相/HILIC色谱柱

  • C18色谱柱堵塞了/出峰分叉/被压过高，如何再生？
    色谱柱的污染可能会导致峰形的变化、峰分裂、肩峰、柱效的变化或背压增加等问题。请参考以下方法进行清洗：
    10%甲醇水溶液（5倍柱体积）→ 含0.1% EDTA的水溶液（10倍柱体积）→ 0.2 M醋酸铵水溶液（10倍柱体积）→ 10%甲醇水溶液（5倍柱体积）→ 甲醇（5倍柱体积）→ 异丙醇（20倍柱体积）→ 甲醇（5倍柱体积）。
    在对色谱柱进行清洗时，为了避免色谱柱上的污染物或其他物质进入流通池，请断开色谱柱与检测器之间的连接；冲洗流速应尽量慢（操作流速的一半），以避免部分溶剂粘度过大而造成的柱压激增。
  • 液相色谱中，色谱峰为什么会扩展？如何减少谙带扩张、提高柱效？
    液相色谱中引起色谱峰扩展的主要因素为涡流扩散、流动相传质、停留流动相传质及柱外效应。在液相色谱中要减小谱带扩张，提高柱效，需要减小填料颗粒直径、减小填料孔穴深度、提高装填的均匀性、采用低粘度溶剂作流动相、流速尽可能低，同时要尽可能采用死体积较小的进样器、检测器、接头和传输管线等。
  • 液相色谱流动相的作用以及要求？
    液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间物质交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下特点：
    1． 纯度：流动相必须用HPLC级的试剂，使用前过滤除去其中的颗粒性杂质和其他物质(使用0.45um或更细的膜过滤)。溶剂所含杂质在柱上积累，会影响色谱柱的使用寿命。
    2． 溶解度：样品的溶解度要适宜如果溶解度，如果溶解度欠佳样品会在柱头沉淀，不但影响纯化分离，还会缩短柱子的使用寿命。
    3． 粘度要低(应<2cp)高粘度溶剂会影响溶质的扩散、传质，降低柱效，还会使柱压降增加，使分离时间延长。选择沸点在100℃以下的流动相。
    4． 样品易于回收。应选用挥发性溶剂。
    5． pH：采用反相色谱法分离弱酸(3≤pKa≤7)或弱碱(7≤pKa≤8)样品时，通过调节流动相的pH值，以抑制样品组分的解离，增加组分在固定相上的保留，并改善峰形的技术称为反相离子抑制技术。
  • 高效液相色谱样品前处理方法
    1. 固相萃取
    利用固体吸附剂吸附待测组分，去除干扰物质，然后用洗脱液将待测组分分离出来。
    多用于食品安全和环境污染分析
    2. 微波辅助萃取
    利用高频电磁波的作用，使样品中待测组分从胞内释放出来，并在低温下溶解于萃取溶剂中，过滤，达到分离的目的。多用于天然药物、农药残留、有机金属化合物等物质的提取。
    3. 超声波辅助萃取
    利用超声波的机械效应、空化作用以及热效应等，破坏样品细胞组织，加大细胞内的传质效率，从而促进待测组分的释放和提取。多用于蛋白质、多糖、烟碱等物质的提取。
    4.超临界流体萃取
    采用二氧化碳作为流体，在超临界条件下，二氧化碳使样品的各组分依次萃取出来，当恢复常温和常压时，溶解在二氧化碳中的待测组分立即以液体状态与气态流体分离。多用于天然物质的提取。
  • 什么是液相色谱柱的柱效率？
    柱效率是指色谱柱在不使化合物扩散的情况下保留化合物的能力。色谱柱效率是指色谱柱获得窄带、改进分离的相对能力。
    顾名思义，柱效率是色谱柱的分离效果。有效塔板数越多，有效塔板高度越低，塔板效率越好，与各塔板的分离效率相似，有效塔板越有效，最终质量越纯净。
  • 如何解决液相色谱仪重现性不好的问题？
    1、自动进样器清洗液流路有气泡：选择合适的清洗液并脱气，使用PURGE功能冲洗进样阀，排除气泡。　　
    2、自动进样器进样口漏液：在流路中进样口发生漏液时，通常是进样口密封垫损坏造成，这时需要更换进样口密封垫。　　
    3、自动进样器流路污染：使用清洗液清洗进样器管路。　　
    4、色谱柱污染或劣化：用洗脱力强的溶剂长时间清洗色谱柱或更换色谱柱。
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